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前沿拓展:

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我国首例非洲猪瘟的确诊

王清华 1,任炜杰 1,包静月 1,戈胜强 1,李金明 1,李 林 1,樊晓旭 1,刘春菊 1,王 华 1,永强 1,徐天刚 1,吴晓东 1,段亚良 2,顾贵波 2,周晨阳 2

(1. **动物卫生与流行病学中心,国家外来动物疫病研究中心,山东青岛 266032;2. 辽宁省动物疫病预防控制中心,辽宁沈阳 110164)

摘 要 :近日,辽宁省沈阳市一养猪户饲养的猪陆续发生不明原因**亡,病**猪剖检发现脾脏异常肿大,疑似非洲猪瘟**感染。经国家外来动物疫病研究中心检测,确诊为非洲猪瘟**核酸阳性,B646L/p72 基因序列417 个碱基与**毒株 100% 匹配,与**和东欧目前流行的格鲁吉亚毒株(Georgia 2007)属于同一进化分支。这是我国发现的首例非洲猪瘟,**来源有待进一步调查。关键词 :非洲猪瘟 ;非洲猪瘟** ;荧光定量 PCR ;普通 PCR ;ASFV 特异性抗体中图分类号 :S852.65 文献标识码 :A

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟**(African swine fever virus, ASFV)引起猪的一种急性、热性、高度接触性动物传染病, 临床上以高热、网状内皮系统出血和高**亡率为特征,易感猪群的病**率高达 100%。鉴于该病的严重危害性,世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病,我国将其列为一类动物疫病。ASFV 不感染人,对人的健康不构成威胁。目前, 针对 ASF 防控,尚无有效的商品化疫苗。

2018 年 8 月 1 日,国家外来动物疫病研究中心接到辽宁省沈阳市沈北区发现 ASF 临床可疑病例的报告(图 1)。截至 8 月 1 日,发病猪场累计**亡 47 头,对刚病**的 2 头猪剖检发现:脾脏极度肿大,严重梗**,质脆易碎,其中一头猪脾肿大至少 10 倍,一头猪脾肿大 5~7 倍;肺出血、质硬,有间质性肺炎变化;下颌淋巴结、肠系膜淋巴结出血,切面呈大理石样变;胃浆膜面弥漫性出血;肾肿胀明显、色淡,未见出血点;扁桃体见陈旧性出血,符合 ASF 症状。国家外来动物疫病研究中心立即开展病原学检测,证实本次**由ASFV 引起。这是我国历史上的首次 ASF 发病记录。

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图 1 发病场地理位置

1 材料与方法

1.1 病料

病原学样品:分别来源于 2 头病**猪的剖检病料,包括全血、脾脏、淋巴结、扁桃体;30 头临床健康猪的全血。

血清样品:2 头病**猪及同群 30 头临床健康猪血清。

1.2 病料 DNA 提取

在加有陶珠的组织匀浆管(Roche)中,加入600 µL PBS 缓冲液,再加入剪碎的组织样品约 30mg,使用 HyBaid RiboLyser 组织匀浆机进行匀浆处理。取 200 µL 组织匀浆液和全血,分别使用** DNA 提取试剂盒提取 DNA。最后将提取的核酸于 −80 ℃冰箱中保存备用。

1.3 荧光定量 PCR

依据文献报道 [1],用本实验室建立的 OIE 推荐的 ASFV 特异的荧光定量 PCR 方法进行 ASFVp72 基因片段的扩增。ASFV 特异性引物为 king-s/ king-a,TaqMan 探针为 ASFVP,同时以本试验室合成的质粒 DNA 标准品为阳性对照。

1.4 普通 PCR

依据文献报道 [2],用本实验室建立的 OIE 推荐的 ASFV 特异的 PCR 方法进行 ASFV p72 基因片段的扩增。ASFV 特异性引物为 PPA1/PPA2,产物长度为 257 bp,同时以本试验室合成的质粒DNA 标准品为阳性对照。

1.5 测序片段 PCR 扩增

依据文献报道 [3-4],合成扩增 p72 基因分型的通用型引物(p72-D/p72-U)。引物由上海生工生物技术有限公司合成。采用高保真的Phusion High- Fidelity PCR Master Mix 扩增B646L/p72 基因片段, 预期扩增片段大小 478 bp。50 μL 的 PCR 反应体系 为 :2X Phusion Master Mix 25 µL,p72-D(10μmol/L) 和 p72-U(10 μmol/L) 各 2 µL, 模 板DNA 2 μL,用灭菌水补齐体积至 50 μL。PCR 反应程序为:98 ℃预变性 30 s;第二进行 35 个 PCR 循环(98 ℃ 10 s,52 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s);最后 72℃ 10 min。

1.6 PCR 产物测定

扩增产物使用 1% 的琼脂糖凝胶电泳,第二切胶回收, 对回收的 DNA 直接用于测序。序列 拼 接 采 用 Lasergene 7.1 软 件(DNASTAR Inc.Madison,WI,USA) 中 的 EditSeq 与 MegAlign 模块。多序列的比对和遗传进化树的绘制,应用MEGA 5.0 软件进行。其他国家的参考毒株序列从GenBank 中获得。

1.7 抗体检测

西班牙 INGENASA 公司生产的非洲猪瘟阻断 ELISA 抗体检测试剂盒,批号为 050218。法国ID-vet 公司生产的非洲猪瘟间接 ELISA 抗体检测试剂盒,批号为 B71。国家外来动物疫病研究中心自主研发的非洲猪瘟间接 ELISA 试剂盒,批号为 201801。INGENASA 公司生产的非洲猪瘟阻断ELISA 试剂盒包被抗原为 p72 蛋白,I**et 公司生产的非洲猪瘟间接ELISA 试剂盒包被抗原为p30、p62、p72 重组蛋白, 自主研发的非洲猪瘟间接ELISA 试剂盒包被抗原为 p30 蛋白。

2 结果

2.1 荧光定量 PCR

荧光定量 PCR 检测结果显示,采自 2 只病**猪的 8 份组织样品和全血中都能检测到ASFV 特异性扩增曲线,Ct 值为 19.14~26.5(图 2)。

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图 2 实时定量 PCR 扩增结果

扩增曲线的横坐标为扩增循环数,纵坐标为荧光强度;绿色横线位置为荧光强度的阈值,对应的循环数为临界循环数(CT);CT 值低于 40 判定为阳性;图中扩增曲线从左至右依次为P、全血 1、脾 1、全血 2、淋巴结 2、肾 2、淋巴结 1、肾 1、脾 2

2.2普通 PCR

ASFV 普通PCR 扩增结果显示,7 个样本(分别为全血 1、淋巴结 1、肾 1、脾 1、全血 2、淋巴结 2、肾 2)在 257 bp 左右有特异性扩增条带,与阳性对照一致(图 3)。样本脾 2 特异性扩增条带较弱。

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图 3 普通 PCR 检测结果

1~8. 全血 1、淋巴结 1、肾 1、脾 1、全血 2、淋巴结 2、肾 2、脾2;P. 阳性对照;N. 阴性对照;M. 分子量标记(由上至下分别为2000、1000、750、500、250、100 bp

2.3 p72 基因片段序列遗传进化分析

对样本 B646L/p72 基因片段普通 PCR 产物进行正反向测序,对得到的序列进行拼接后获得 p72基因片断序列,长度为 417 bp(图 4)。对扩增的P72 基因序列,应用邻接法(Neighbor-joining)绘制了遗传发生树(图 5)。结果显示,该样本**属于基因 II 型,与目前在**和东欧流行的格鲁吉亚毒株(Georgia 2007)同属于一个进化分支。

2.4 抗体检测

对 32 份血清样品的 ASFV 特异性抗体检测结果均为阴性。

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图 4 样本 p72 基因片段测序结果

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图 5 P72 基因遗传进化分析

3 讨论

ASFV 是非洲猪瘟**科(Asfarviridae) 非洲猪瘟**属的唯一成员, 基因组为双股线状DNA,大小为 170~190 kb。根据**编码主要衣壳蛋白 p72 的 B646L 基因,可将该病分为 24 个与地域性相关的基因型 [5-6]。基因 II 型流行于非洲东南部,2007 年传至格鲁吉亚,并扩散到**联邦和东欧地区 [7],已在高加索地区定殖;2017 年,该基因型**向东长距离跨越式传播至**远东地区伊尔库茨克 [9],导致传入我国的风险空前升高。目前,ASF 已经成为困扰欧洲养猪业的一个重要问题 [8]。该病跨国界传播能力和危害性使其成为全球性的问题。

本次**是我国确诊的首例非洲猪瘟。该猪场生物安全条件较差,紧临车辆繁忙的乡间公路, 场区出入口无消毒池。病**猪在当地兽医部门监督下就近掩埋处理,有相应的生猪保险理赔记录。剩余存栏生猪 336 头,临床未见异常。据了解,**亡猪多为 100 kg 的大猪。p72 基因片段遗传进化分析显示,本次暴发流行的毒株为基因 II 型,与**及东欧流行的毒株属同一分支,提示**可能来自**和东欧**国家。为进一步确定**与**和东欧流行株的差异,正在对全基因组序列进行分析。值得注意的是,该起**的病**率虽然很高(100%),但发病率和**亡率较低,发病高峰期 10 头左右,平常日均**亡 3 头左右。此外,同群猪临床健康,随机采集 30 头猪的抗凝血、血清样品的病原学检测结果和血清学检测结果均为阴性,提示该起**毒株的群内传播能力或有一定局限性。

感染生猪及其产品的移动是导致**快速远距离传播的主要途径。尤其值得注意的是,ASFV 在未经高温处理的肉品中存活能力很强,未经高温处理的泔水、烟熏肉、风干肉、腌肉、火腿等也是造成**跨区域传播的重要因素。历史上,多起跨境传播的 ASF **与航空器、列车运载上述猪肉制品的处理不当、感染ASF 野猪移动有关[10]。目前, 应加强流行病学调查和主动监测排查工作,特别对病**猪的检测,应重点关注屠宰场、病**生猪无害化处理场等高风险场点,对已发现的确诊病例要做进一步追溯排查;加大科普宣传,发动养猪户、诊疗人员和相关从业人员主动上报可疑情况。若发生**,应严格按照《非洲猪瘟**应急预案》和《非洲猪瘟防治技术规范》进行处置。

致谢:

**动物卫生与流行病学中心王志亮总兽医师在**调查和检测分析过程中给予悉心指导,辽宁省动物疫病预防控制中心积极协助调查并提供样品。

参考文献:

[1] KING D P,REID S M,HUTCHINGS G H, et al. Development of a TaqMan PCR assay with internal amplification control for the detection of African swine fever virus[J]. Journal of virology methods,2003,107(1):53-61.

[2] AGUERO M,FERNANDEZ J,ROMEROL,et al. Highly sensitive PCR assay for routine diagnosis of African swine fever virus in clinical samples[J]. Journal of clinical microbiology, 2003,41(9):4431-4434.

[3] BASTOS A D,PENRITH M L,CRUCIERE C,et al. Genotyping field strains of African swine fever virus by partial p72 gene characterisation[J]. Archives of virology,2003,148(4):693- 706.

[4] LUBISI B A,BASTOS A D,DWARKA R M, et al. Molecular epidemiology of African swine fever in East Africa[J]. Archives of virology, 2005,150(12):2439-2452.

[5] ACHENBACH J E,GALLARDO C,NIETO-PELEGRIN E,et al. Identification of a new genotype of African swine fever virus in domestic pigs from Ethiopia[J]. Tran**oundary emerging disease,2017,64(5):1393-1404.

[6] QUEMBO C J, JORI F, VOSLOO W,et al. Genetic characterization of African swine fever virus isolates from soft ticks at the wildlife/domestic interface in Mozambique and identification of a novel genotype[J]. Tran**oundary emerging disease,2018,65(2): 420-431.

[7] GALINDO I,ALONSO C. African swine fevervirus: a review[J]. Viruses,2017,9(5).

[8] SANCHEZ-CORDON P J,MONTOYA M, REIS A L,et al. African swine fever: A re- emerging viral disease threatening the global pig industry[J]. Journal of veterinary medical science,2018,233:41-48.

[9] KOLBASOV D,TITOV I,TSYBANOV S,et al. African swine fever virus,Siberia,Russia, 2017[J]. Emerging infectious disease,2018,24(4):796-798.

[10] BROWN V R,BEVINS S N. A review of African swine fever and the potential for introduction into the United States and the possibility of subsequent establishment in feral swine and native ticks[J]. Frontiers in veterinary science,2018,5:11.

拓展知识:

前沿拓展:

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15日就和谐的出现 更新成功 了!

最后, 希望本文能帮助到 大家~ 源自:影子博客


我国首例非洲猪瘟的确诊

王清华 1,任炜杰 1,包静月 1,戈胜强 1,李金明 1,李 林 1,樊晓旭 1,刘春菊 1,王 华 1,永强 1,徐天刚 1,吴晓东 1,段亚良 2,顾贵波 2,周晨阳 2

(1. **动物卫生与流行病学中心,国家外来动物疫病研究中心,山东青岛 266032;2. 辽宁省动物疫病预防控制中心,辽宁沈阳 110164)

摘 要 :近日,辽宁省沈阳市一养猪户饲养的猪陆续发生不明原因**亡,病**猪剖检发现脾脏异常肿大,疑似非洲猪瘟**感染。经国家外来动物疫病研究中心检测,确诊为非洲猪瘟**核酸阳性,B646L/p72 基因序列417 个碱基与**毒株 100% 匹配,与**和东欧目前流行的格鲁吉亚毒株(Georgia 2007)属于同一进化分支。这是我国发现的首例非洲猪瘟,**来源有待进一步调查。关键词 :非洲猪瘟 ;非洲猪瘟** ;荧光定量 PCR ;普通 PCR ;ASFV 特异性抗体中图分类号 :S852.65 文献标识码 :A

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟**(African swine fever virus, ASFV)引起猪的一种急性、热性、高度接触性动物传染病, 临床上以高热、网状内皮系统出血和高**亡率为特征,易感猪群的病**率高达 100%。鉴于该病的严重危害性,世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病,我国将其列为一类动物疫病。ASFV 不感染人,对人的健康不构成威胁。目前, 针对 ASF 防控,尚无有效的商品化疫苗。

2018 年 8 月 1 日,国家外来动物疫病研究中心接到辽宁省沈阳市沈北区发现 ASF 临床可疑病例的报告(图 1)。截至 8 月 1 日,发病猪场累计**亡 47 头,对刚病**的 2 头猪剖检发现:脾脏极度肿大,严重梗**,质脆易碎,其中一头猪脾肿大至少 10 倍,一头猪脾肿大 5~7 倍;肺出血、质硬,有间质性肺炎变化;下颌淋巴结、肠系膜淋巴结出血,切面呈大理石样变;胃浆膜面弥漫性出血;肾肿胀明显、色淡,未见出血点;扁桃体见陈旧性出血,符合 ASF 症状。国家外来动物疫病研究中心立即开展病原学检测,证实本次**由ASFV 引起。这是我国历史上的首次 ASF 发病记录。

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图 1 发病场地理位置

1 材料与方法

1.1 病料

病原学样品:分别来源于 2 头病**猪的剖检病料,包括全血、脾脏、淋巴结、扁桃体;30 头临床健康猪的全血。

血清样品:2 头病**猪及同群 30 头临床健康猪血清。

1.2 病料 DNA 提取

在加有陶珠的组织匀浆管(Roche)中,加入600 µL PBS 缓冲液,再加入剪碎的组织样品约 30mg,使用 HyBaid RiboLyser 组织匀浆机进行匀浆处理。取 200 µL 组织匀浆液和全血,分别使用** DNA 提取试剂盒提取 DNA。最后将提取的核酸于 −80 ℃冰箱中保存备用。

1.3 荧光定量 PCR

依据文献报道 [1],用本实验室建立的 OIE 推荐的 ASFV 特异的荧光定量 PCR 方法进行 ASFVp72 基因片段的扩增。ASFV 特异性引物为 king-s/ king-a,TaqMan 探针为 ASFVP,同时以本试验室合成的质粒 DNA 标准品为阳性对照。

1.4 普通 PCR

依据文献报道 [2],用本实验室建立的 OIE 推荐的 ASFV 特异的 PCR 方法进行 ASFV p72 基因片段的扩增。ASFV 特异性引物为 PPA1/PPA2,产物长度为 257 bp,同时以本试验室合成的质粒DNA 标准品为阳性对照。

1.5 测序片段 PCR 扩增

依据文献报道 [3-4],合成扩增 p72 基因分型的通用型引物(p72-D/p72-U)。引物由上海生工生物技术有限公司合成。采用高保真的Phusion High- Fidelity PCR Master Mix 扩增B646L/p72 基因片段, 预期扩增片段大小 478 bp。50 μL 的 PCR 反应体系 为 :2X Phusion Master Mix 25 µL,p72-D(10μmol/L) 和 p72-U(10 μmol/L) 各 2 µL, 模 板DNA 2 μL,用灭菌水补齐体积至 50 μL。PCR 反应程序为:98 ℃预变性 30 s;第二进行 35 个 PCR 循环(98 ℃ 10 s,52 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s);最后 72℃ 10 min。

1.6 PCR 产物测定

扩增产物使用 1% 的琼脂糖凝胶电泳,第二切胶回收, 对回收的 DNA 直接用于测序。序列 拼 接 采 用 Lasergene 7.1 软 件(DNASTAR Inc.Madison,WI,USA) 中 的 EditSeq 与 MegAlign 模块。多序列的比对和遗传进化树的绘制,应用MEGA 5.0 软件进行。其他国家的参考毒株序列从GenBank 中获得。

1.7 抗体检测

西班牙 INGENASA 公司生产的非洲猪瘟阻断 ELISA 抗体检测试剂盒,批号为 050218。法国ID-vet 公司生产的非洲猪瘟间接 ELISA 抗体检测试剂盒,批号为 B71。国家外来动物疫病研究中心自主研发的非洲猪瘟间接 ELISA 试剂盒,批号为 201801。INGENASA 公司生产的非洲猪瘟阻断ELISA 试剂盒包被抗原为 p72 蛋白,I**et 公司生产的非洲猪瘟间接ELISA 试剂盒包被抗原为p30、p62、p72 重组蛋白, 自主研发的非洲猪瘟间接ELISA 试剂盒包被抗原为 p30 蛋白。

2 结果

2.1 荧光定量 PCR

荧光定量 PCR 检测结果显示,采自 2 只病**猪的 8 份组织样品和全血中都能检测到ASFV 特异性扩增曲线,Ct 值为 19.14~26.5(图 2)。

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图 2 实时定量 PCR 扩增结果

扩增曲线的横坐标为扩增循环数,纵坐标为荧光强度;绿色横线位置为荧光强度的阈值,对应的循环数为临界循环数(CT);CT 值低于 40 判定为阳性;图中扩增曲线从左至右依次为P、全血 1、脾 1、全血 2、淋巴结 2、肾 2、淋巴结 1、肾 1、脾 2

2.2普通 PCR

ASFV 普通PCR 扩增结果显示,7 个样本(分别为全血 1、淋巴结 1、肾 1、脾 1、全血 2、淋巴结 2、肾 2)在 257 bp 左右有特异性扩增条带,与阳性对照一致(图 3)。样本脾 2 特异性扩增条带较弱。

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图 3 普通 PCR 检测结果

1~8. 全血 1、淋巴结 1、肾 1、脾 1、全血 2、淋巴结 2、肾 2、脾2;P. 阳性对照;N. 阴性对照;M. 分子量标记(由上至下分别为2000、1000、750、500、250、100 bp

2.3 p72 基因片段序列遗传进化分析

对样本 B646L/p72 基因片段普通 PCR 产物进行正反向测序,对得到的序列进行拼接后获得 p72基因片断序列,长度为 417 bp(图 4)。对扩增的P72 基因序列,应用邻接法(Neighbor-joining)绘制了遗传发生树(图 5)。结果显示,该样本**属于基因 II 型,与目前在**和东欧流行的格鲁吉亚毒株(Georgia 2007)同属于一个进化分支。

2.4 抗体检测

对 32 份血清样品的 ASFV 特异性抗体检测结果均为阴性。

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图 4 样本 p72 基因片段测序结果

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图 5 P72 基因遗传进化分析

3 讨论

ASFV 是非洲猪瘟**科(Asfarviridae) 非洲猪瘟**属的唯一成员, 基因组为双股线状DNA,大小为 170~190 kb。根据**编码主要衣壳蛋白 p72 的 B646L 基因,可将该病分为 24 个与地域性相关的基因型 [5-6]。基因 II 型流行于非洲东南部,2007 年传至格鲁吉亚,并扩散到**联邦和东欧地区 [7],已在高加索地区定殖;2017 年,该基因型**向东长距离跨越式传播至**远东地区伊尔库茨克 [9],导致传入我国的风险空前升高。目前,ASF 已经成为困扰欧洲养猪业的一个重要问题 [8]。该病跨国界传播能力和危害性使其成为全球性的问题。

本次**是我国确诊的首例非洲猪瘟。该猪场生物安全条件较差,紧临车辆繁忙的乡间公路, 场区出入口无消毒池。病**猪在当地兽医部门监督下就近掩埋处理,有相应的生猪保险理赔记录。剩余存栏生猪 336 头,临床未见异常。据了解,**亡猪多为 100 kg 的大猪。p72 基因片段遗传进化分析显示,本次暴发流行的毒株为基因 II 型,与**及东欧流行的毒株属同一分支,提示**可能来自**和东欧**国家。为进一步确定**与**和东欧流行株的差异,正在对全基因组序列进行分析。值得注意的是,该起**的病**率虽然很高(100%),但发病率和**亡率较低,发病高峰期 10 头左右,平常日均**亡 3 头左右。此外,同群猪临床健康,随机采集 30 头猪的抗凝血、血清样品的病原学检测结果和血清学检测结果均为阴性,提示该起**毒株的群内传播能力或有一定局限性。

感染生猪及其产品的移动是导致**快速远距离传播的主要途径。尤其值得注意的是,ASFV 在未经高温处理的肉品中存活能力很强,未经高温处理的泔水、烟熏肉、风干肉、腌肉、火腿等也是造成**跨区域传播的重要因素。历史上,多起跨境传播的 ASF **与航空器、列车运载上述猪肉制品的处理不当、感染ASF 野猪移动有关[10]。目前, 应加强流行病学调查和主动监测排查工作,特别对病**猪的检测,应重点关注屠宰场、病**生猪无害化处理场等高风险场点,对已发现的确诊病例要做进一步追溯排查;加大科普宣传,发动养猪户、诊疗人员和相关从业人员主动上报可疑情况。若发生**,应严格按照《非洲猪瘟**应急预案》和《非洲猪瘟防治技术规范》进行处置。

致谢:

**动物卫生与流行病学中心王志亮总兽医师在**调查和检测分析过程中给予悉心指导,辽宁省动物疫病预防控制中心积极协助调查并提供样品。

参考文献:

[1] KING D P,REID S M,HUTCHINGS G H, et al. Development of a TaqMan PCR assay with internal amplification control for the detection of African swine fever virus[J]. Journal of virology methods,2003,107(1):53-61.

[2] AGUERO M,FERNANDEZ J,ROMEROL,et al. Highly sensitive PCR assay for routine diagnosis of African swine fever virus in clinical samples[J]. Journal of clinical microbiology, 2003,41(9):4431-4434.

[3] BASTOS A D,PENRITH M L,CRUCIERE C,et al. Genotyping field strains of African swine fever virus by partial p72 gene characterisation[J]. Archives of virology,2003,148(4):693- 706.

[4] LUBISI B A,BASTOS A D,DWARKA R M, et al. Molecular epidemiology of African swine fever in East Africa[J]. Archives of virology, 2005,150(12):2439-2452.

[5] ACHENBACH J E,GALLARDO C,NIETO-PELEGRIN E,et al. Identification of a new genotype of African swine fever virus in domestic pigs from Ethiopia[J]. Tran**oundary emerging disease,2017,64(5):1393-1404.

[6] QUEMBO C J, JORI F, VOSLOO W,et al. Genetic characterization of African swine fever virus isolates from soft ticks at the wildlife/domestic interface in Mozambique and identification of a novel genotype[J]. Tran**oundary emerging disease,2018,65(2): 420-431.

[7] GALINDO I,ALONSO C. African swine fevervirus: a review[J]. Viruses,2017,9(5).

[8] SANCHEZ-CORDON P J,MONTOYA M, REIS A L,et al. African swine fever: A re- emerging viral disease threatening the global pig industry[J]. Journal of veterinary medical science,2018,233:41-48.

[9] KOLBASOV D,TITOV I,TSYBANOV S,et al. African swine fever virus,Siberia,Russia, 2017[J]. Emerging infectious disease,2018,24(4):796-798.

[10] BROWN V R,BEVINS S N. A review of African swine fever and the potential for introduction into the United States and the possibility of subsequent establishment in feral swine and native ticks[J]. Frontiers in veterinary science,2018,5:11.

拓展知识:

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